فهرست

ساخت محلولها :

1- محلولهای بافری:

2- محلولهای االکتروفورز:

2-1- محلول بافر B:

3-1- محلول بافر C:

1-2- محلول بافر تانک یا الکترود:

2-2-محلول بافر ژل متراکم کننده (ژل فوقانی):

3-2- محلول بافر ژل جدا کننده (ژل تحتانی):

4-2- محلول بافر نمونه (× 5):

6-2- محلول آمونیوم پرسولفات (APS):

1-3- محلول رنگامیزی کوماسی بلو G-250:

2-3- محلولهای رنگامیزی نقره :

 

 

 

ساخت محلولها :

1- محلولهاي بافري:

1-1- محلول بافر A :

اين محلول ، بافر تريس بازي با غلظت mM 50 ،‌8/5=PH مي باشد كه از محلول استوك آن ،‌با غلظت mM200 به طريقة زير تهيه شد:

مقدار g22/24 تريس بازي وزن شد و با ml800 آب مقطر در يك بشر يك ليتري مخلوط شد. PH اين محلول با استفاده از محلول Hcl ،‌37% تا 8/5= pH پائين آورده شد. سپس حجم نهايي توسط آب مقطر به يك ليتر رسانده شد. محلول استوك بدست آمده ، 4 بار رقيق شد تا محلول بافر A حاصل شد.

2-1- محلول بافر B:

اين محلول ، بافر تريس بازي با غلظت mM50 ،‌8/6PH= مي باشد كه همانند محلول بافر A تهيه شد با اين تفاوت كه كاهش pH محلول تا 8/6=pH  صورت گرفت.

3-1- محلول بافر C:

اين محلول ، بافر فسفات سديم با غلظت mM10،8/6= pH است كه از محلول استوك آن با غلظت mM 100به طريقه زير تهيه گرديد:

مقدار g81/35 نمك فسفات دي سديك و g6/15 نمك فسفات مونوسديك به همراه ml800 آب مقطر در يك بشر يك ليتري مخلوط شد. سپس pH محلول توسط محلول Hcl، 37% تا 8/6= pH پائين آورده شد و با آب مقطر حجم نهايي محلول به يك ليتر رسانده شد. محلول استوك بدست آمده ، 10 بار رقيق شد تا محلول بافر c بدست آمد.

2- محلولهاي االكتروفورز:

1-2- محلول بافر تانك يا الكترود:

اين محلول شامل تريس بازي با غلظت M025/0 و گلايسين با غلظت M192/0 ، با 3/8= pH در آزمايشات الكتروفورز بكار گرفته شد. اين محلول به حجم يك ليتر به صورت زير تهيه شد:

مقدار g03/3 تريس بازي و g4/14 گلايسين وزن شده و در يك بشر يك ليتري تا حجم يك ليتر ، آب مقطر به آنها اضافه گرديد.

2-2-محلول بافر ژل متراكم كننده (ژل فوقاني):

اين محلول با غلظت M5/0 تريس بازي ، 8/6 = pH به طريقة زير تهيه شد:

مقدار g 1/6 تريس بازي به همراه ml70 آب مقطر در يك بشر مخلوط شد و با كمك محلول Hcl37%، pH  آن تا 8/6 كاسته گرديد. سپس حجم نهايي محلول با آب مقطر به ml100 رسانده شد.

3-2- محلول بافر ژل جدا كننده (ژل تحتاني):

اين محلول با غلظت M5/1 تريس بازي ، 8/8 = pH به طريقة زير تهيه شد:

مقدار g 2/18 تريس بازي در ml70آب مقطر به حالت محلول درآورده شد و توسط محلول Hcl37% pH آن تا  8/8 كاهش پيدا كرد. سپس حجم نهايي محلول با آب مقطر به  ml 100 رسانده شد.

4-2- محلول بافر نمونه (× 5):

حجم ml15 محلول بافر تريس بازي با غلظت 1M، 8/6= pH (g81/1 تريس بازي در ml15 آب مقطر) تهيه شد. به اين محلول ml25گليسرول ، و ml10 آب مقطر افزوده گرديد و بخوبي مخلوط شد. به محلول حاصل چند بلور رنگ برموفنل بلو اضافه شد تا محلول به رنگ آبي تيره درآمد.

5-2- محلول آكريل آميد – بيس آكريل آميد:

پودر آكريل آميد و بيس آكريل آميد سمي بوده و بايد از استنشاق آنها جلوگيري كرد. جهت تهيه محلول استوك 8/30% از آن با استفاده از دستكش و ماسك ، در زير هود شيميايي ،‌مقدار g30 پودر آكريل آميد و g8/0 پودر بيس آكريل آميد وزن شد و در يك بشر تا حجم ml100 آب مقطر مخلوط گرديد. براي حل شدن بهتر مواد فوق در آب مقطر ، بشر در حمام آب گرم قرار داده شد و به كمك همزن مغناطيسي به مدت 30 دقيقه مخلوط شد. سپس محلول بدست آمده توسط كاغذ صافي فيلتر شد و در ظرف تيره رنگي در يخچال نگهداري گرديد. محلول فوق خطرناك و نورو توكسيك مي باشد و در طي كار آبا آن بايد از دستكش استفاده كرد.

6-2- محلول آمونيوم پرسولفات (APS):

جهت تهية محلول 10 درصد APS، مقدار g1/0 پودر آمونيوم پرسولفات وزن شده و در 1ml آب مقطر حل گرديد. اين محلول بهتر است تازه تهيه شده و در يخچال نگهداري شود.

3- محلولهاي رنگاميزي ژل پلي آكريل آميد:

1-3- محلول رنگاميزي كوماسي بلو G-250:

حجم ml50 محلول رنگاميزي با مخلوط كردن اجزاء زير تهيه گرديد:

ml15 متانل و ml10 اسيد استيك گلاسيال با ml25آب مقطر مخلوط شد. به محلول حاصل مقدار g2/0-1/0 رنگ كوماسي بلو G-250 اضافه گرديد تا محلول آبي تيره رنگي بدست آمد. اين محلول بعنوان محلول ثبوت پروتئينها نيز عمل مي كند.

1-1-3- محلول رنگبر:

براي زدودن رنگ از ژل ، به حجم بيشتري محلول رنگبر نسبت به محلول رنگاميزي نياز است . حجم ml100از اين محلول براي رنگبري يك ژل كوچك با ضخامت mm75/0 كافي مي باشد. براي تهية آن ml30 متانل و ml20 اسيد استيك با ml50 آب مقطر مخلوط شد و در ظرف درب بسته اي نگهداري گرديد.

 

1-2-3- معرف ثبوت:

حجم ml60 محلول استوك استن 50% (V/V) (ml30 استن در ml30 آب مقطر) با حجم ml5/1 محلول استوك تري كلرواستيك اسيد (TCA) 50% (V/V) (ml 75/0TCA در ml75/0 آب مقطر ) مخلوط شد. سپس 25 ميكروليتر محلول فرمالدتيد 37% اضافه شد.

2-2-3- محلول پيش تيمار II :

 

شما هم می توانید در مورد این فایل نظر دهید.